除了平板實驗之外,秦霜還交給陸成的另外一個實驗就是Transwell侵襲實驗,侵襲實驗其實和平板劃痕實驗的性質是差不多的。
但是兩者的目的卻是稍有差別。
很容易理解,平板劃線法是在平板上,也就是一個平面上,細胞的遷移速率,與正常組細胞進行對比,從而得出處理組的遷移速率是快還是慢。
但是Transwell卻是不一樣的,因為Transwell小盒子的上層鋪了一層膠質,這一層膠質可以阻擋細胞的下移,只有細胞分泌出可以溶解這一層膠質的金屬蛋白酶,才能夠破開膠質,然后達到營養更加豐富的下層。
這是針對腫瘤細胞侵襲能力,也是它能夠分泌金屬蛋白酶,穿破一定的障礙物的能力,發生侵襲的實驗。
所以其實兩個實驗的模式是完全不一樣的、
因為秦霜已經養好了細胞,所以陸成再進行后續的操作的時候,就直接省去了再要重頭開始養細胞的步驟,
而兩個實驗中,平板劃線法的實驗最多只需要48h即可,但是這個實驗唯一有的麻煩就是,必須在6、12、18、24和48小時的時候,記錄下劃痕縮小的面積,以此來算遷移比率。
是相對比較消耗時間的一種。而Transwell實驗,也是需要計算下層更加豐富的營養基質中細胞的數量,來計算兩組細胞侵襲能力的差異的。
如此一來,陸成除了明天晚上必須要守在實驗室之外,后天的相同時間,也要來到實驗室再進行一次統計,這樣與他后天的手術,略有沖突。
雖然最后是有沖突的,但是陸成還是選擇了在今天就完成了相應的操作。因為在細胞鋪滿平板之前,需要經過二十四小時的沉淀,才能夠均勻的鋪滿,然后好進行劃線的操作。
大不了,后天讓一個師姐或是師哥幫他看一下就行了。
看到陸成利索地完成了相應的操作,秦霜也是放下了心來。
這看似是一種破罐子破摔的行為,但是其實也是對陸成一些基礎實驗的一種考驗,如果陸成連平板劃線的前期準備工作都做不好,那么后續的實驗操作,他可能就真的需要一點一點來學的。
而且,秦霜還注意了陸成在做Transwell實驗前期準備的一個細節,那就是讓腫瘤細胞處于饑餓狀態。
處于饑餓狀態,也就是營養不足一段時間的腫瘤細胞,是更加迫切地需要大量的營養的,這樣可以更加增加它的侵襲力,讓實驗的操作更加具有說服力。
而與此同時,陸成在完成了這兩步的前期準備之后,也是有實驗室的其他人,慢慢地給陸成布置了任務了。
就比如說費恩教授的兩個博士生,凱瑟琳和查爾斯,都是把簡單的細胞培養的操作,交給了陸成。
雖然講,細胞的培養,也就是換液、分裝這些最為基本的操作,但是,這是一個好的開始,陸成明白自己才來實驗室第二天。
就有師兄和師姐愿意給他操作讓他練習,這就是一個好的開始了,也代表了別人的認可。
有了基礎的實驗放手了,那么后續的實驗,還會晚嗎?
當天的下午,就有一個師兄主動地帶著陸成完成了一次WB的相應操作,并且,還有一位做了過表達基因轉錄處理細胞組的師姐,還帶著陸成做了RTPCR的操作。
陸成知道這個RTPCR的操作目的。
這是進行很多實驗中都是比較重要的一環。
比如說,我們需要研究一個基因,那么一般都至少會分成以下幾組。
第一組,某個基因的普通對照組,也叫陰性對照組,也就是不進行任何的處理。
第二組,則是某個基因的過表達組,使得這個基因在某一個細胞的基因序列中高表達,高表達之后,看它后續實驗中,是否會出現與陰性對照組不一樣的地方,來進行判別基因的功能。
同樣的,為了避免它增多的陽性效果帶來的誤差,同時會對這個基因進行沉默或是敲除,也就是在沉默了這段基因,不讓它表達功能的時候,與陰性組對比,是否會出現一系列的差異。
如此更具有說服力。
這是常規的第三分組。
第四分組,如果需要實驗更加的完善的話,那么肯定還需要用一個專門的基因沉默的藥物,與正常組作比較,證實它是可以通過藥物來沉默的,以驗證這個基因具有研究價值,甚至可能用于臨床。
以上的四個分組相互比較之后,就是一組比較完善的實驗組的分配了,做到這么系統的對比,說服力自然是大大加強。
但是,這一切對照組有效的前提就是,你得證明你的確是過表達了或是沉默了基因。
這個時候,就需要RTPCR來驗證基因序列的表達量了,也是用來篩選可能出現的,轉染不成功,或是轉染效率很小的情況。
很多的實驗,很可能有人因為麻煩、費錢就會省掉這一步,但是這并不符合一個比較嚴謹的實驗流程的。
因此,陸成也是知道了RTPCR的相關操作流程,至少看了一遍,再結合理論的知識,下一次自己要做的時候,心里至少知道該怎么做。
而且以陸成現在幾乎是過目不忘的能力,這些操作他只要看了一遍,幾乎就能夠完全記住,所以根本就不害怕到時候重復不出來。
如此一來,陸成在實驗室的第一小步,就這么走了出去。
實驗室里的人也是知道了陸成這個新人的存在,而且,在秦霜、凱瑟琳等人的介紹下,她們還同時給一些研究生的學弟和學妹交待,如果有什么簡單的,不愿意做的,比較麻煩的操作,可以讓陸成給練練手。
嘿,還真別說,因為秦霜和凱瑟琳的開口,陸成第二天就被委托了幾個實驗操作。
比如是讓陸成測幾瓶腫瘤細胞里面乳酸和葡萄糖的濃度,這些比較簡單的操作。
陸成當然不會嫌棄他簡單啊,因為雖然操作簡單,但是量并不小。
因為知道了陸成反正要做測定乳酸和葡萄糖,于是就像實驗室里的傳統一樣,一些需要做這兩樣測定的所有其他人,都是不約而同的把自己的細胞交給了陸成。
堆積下來,竟然就有四份樣本需要做了。
練手的機會可是大大的有。
陸成看了一下,操作明天中午來做一下就差不多了。
時間緩緩而過,一下子就來到了周三。
周三的早上,陸成雖然很早就來到了實驗室,但是其實他的心情并不是很好的。
因為就像之前就預料過的,周二進行手術的雷克斯,術中所見,并不是很好,幾乎已經廣泛的轉移了,雖然目前沒有發現遠處轉移的證據。
但是,那幾乎是可以預料的事情,而且也沒有任何的化療方案對其進行補救。
也就是說,最后,等待雷克斯的,就只有三到五年的壽命,這個年輕的小伙子就會離開世界。
當時雷克斯的父母和雷克斯都沒辦法接受這個事實,但是,事實就是如此,這是任何人都沒有辦法逆轉的事情,這也是當前的技術限制。
雖然他們大哭一場,但是除了自己的發泄和在陸成等人的心里留下了一絲絲的不安和不忍外,改變不了任何的事實。
即便最后雷克斯也想過要轉院去其他更好的醫院看看機會。
但是陸成覺得,即便雷克斯再怎么周轉,恐怕最后也都無法逃離事實。
他的病理檢查,已經采集了好幾次,幾乎已經能夠確診,而且,不是說張興教授給他的化療方案不行,才導致的他化療無效,而是他本身就對這些化療的藥物不敏感。
這不是任何人的問題,也不是藥物的問題,就只是上限就在那里。
雖然有些難過,但是第二天該過的日子還是得過,就像張興教授今天仍然要繼續做手術一樣,就像陸成今天也要來這邊看看他昨天進行的那些實驗操作的最后結果。
平板劃線實驗,都是陸成昨天下了雷克斯的手術之后,來實驗室做的。
因為當時他就看到了陸成的狀態不是特別好。
的確是這樣,陸成在手術室這么久時間,這個雷克斯是他第一個遇到了,只能給他進行姑息性手術,而沒辦法進行完整手術的人。
而且,后面的那臺手術也相對比較簡單,陸成就來實驗室做實驗了,正好調節一下心情。
陸成先是看了看昨天做的平板劃線的平板,在鏡子之下一看。
“欸!這兩條線,就比較好看了。”陸成頓時心神大振,畢竟來這里,秦霜師姐的第一個實驗就比較熟練且比較好地完成了,這對陸成產生自信心也是有幫助的。
于是陸成就喊秦霜過來看。
秦霜正在查文獻,一聽到陸成的話,緩緩地回頭看了陸成一眼,
“你說什么?”就像是脖子是機器裝的,而不是肌肉,很是生硬。
秦霜覺得自己是不是聽錯了。
“秦霜師姐,你要我做的那個平板劃線實驗,我做完了,我覺得效果還挺不錯的,你要不要過來看一看?”
“我怕我看錯了。”
陸成再次確定道。
秦霜立刻離開了座位,然后風風火火地闖進了細胞處置室內,接著陸成都還沒從顯微鏡下取下來的平板就看了起來。
然后看了看標記,再看了看另一組的結果。
秦霜頓時沉默了。
兩組的差距,肉眼是能夠看得出來的,如果做成柱狀圖,必然是一張十分好看的圖片,她謝過很多文章,這樣的預判能力還是有的。
這種情況,與她之前做出來的很不一樣,她做出來的就是差異不太明顯,如果明顯了,那么不管是對照組好還是實驗組比較好,那都是極為有意義并且值得深究的。
但是,她做出來的沒有意義,然后死馬當活馬醫地給陸成了,陸成就真的做出來了陽性結果。
這怎么說?
“你?”秦霜略有些復雜地看了看陸成,她幾乎都已經打算放棄了當前的實驗方案,然后另謀他路了,現在陸成做出來這個結果。
是不是告訴她她還需要和這個實驗方案硬磕個十次八次的。
萬一陸成做出來的是巧合或者就是個錯誤的呢?
秦霜當即就道:“算了,我還是自己再來重復一遍吧。”
秦霜準備繼續培養細胞的時候,才發現陸成之前把相應的細胞都用完了,所以需要她重新復蘇。
秦霜于是又問:“你在做的時候,具體的操作流程是怎么樣的?有操作記錄嗎?”
陸成自然不傻,注意到了秦霜的神態變化,趕緊道:“有的,秦霜師姐,還有其他的師姐看著我做的,操作和流程都是沒問題的,我這就拿給你。”
秦霜細致的一看,陸成的操作記錄,都是比較正規的,雖然說在用的試劑方面和她平時用的濃度不是特別一樣。
但是,試劑的濃度差異,不應該會影響到結果的方向性才對。
秦霜心里有很多疑問,但最終還是沒有問出來,只是說:“行吧,我們明天再看,然后你再好好地看那個Transwell的結果吧,如果Transwell的結果和我重復的結果,都是和你的實驗結果是一致的。”
“那么,我們就可以進行下一步實驗了。”
秦霜并沒有提她操作失敗的事情,倒不是因為她怕丑,而是怕陸成一下子就覺得自己站得很高,然后摔下去。
秦霜自然是注意到了兩人操作的差異,她準備重復一次自己之前的實驗操作,再重復一次陸成當前濃度的操作,這樣做對比,才能夠知道到底是不是試劑濃度的問題,影響了最終的實驗結果。
比較,對照,永遠都是實驗和嚴謹離不開的話題。
再沒過多長時間,陸成那Transwell小盒下層侵襲下來的腫瘤細胞的數量,也是最終定了型,在進行了染色之后,再進行了計數。
陸成再一次地把秦霜喊了過來。
陸成看著這一密一稀疏的兩個實驗結果,再次沉默,然后開始查文獻去了。
她查的文獻正是與試劑濃度與實驗想過相關的最為基礎的文章……
這一幕,實驗室里的其他人都聽到了,頓時正在細胞房里面的幾個人就是面面相覷地看著陸成,眼神中都充滿了不可思議之色……